運(yùn)用ELISA檢測試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照操控實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)效果的準(zhǔn)確性。ELISA試劑盒有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)。
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其間包含：
固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，ELISA試劑盒時(shí)刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一起，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg／ml。
除此之外還要注意以下事項(xiàng)：
1.承認(rèn)ELISA檢測試劑盒在有效期內(nèi)；
2.仔細(xì)閱讀闡明書；
3.按說明書承認(rèn)全部試劑*（數(shù)量、體積）；
4.標(biāo)本制備要規(guī)范，ELISA試劑盒每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存；
5.依據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量承認(rèn)所需試劑的量；
6.準(zhǔn)備好全部實(shí)驗(yàn)額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；
7.按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制作所需試劑。
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