一、污染的防范
防范是防止細胞培養過程中發生污染的方法。只有防范作業做在前，才華將發生污染的可能性降到小程度。一般防范可從以下幾方面著手：
（一）從操作者做起
1、操作者責任心要強，要仔細穩重，操作技術要嫻熟。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規定穿阻隔衣。進入后關好門，坐下來盡量少走動。作業開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和炙烤瓶口。事先要嚴峻查看器材、溶液和培養物，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨意運用，防止形成大批污染。
2、操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內翻開瓶口，并將瓶口滾動炙烤。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應轉向反面。
3、操作時要常替換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發現吸管口觸摸了手和其他污染物品應棄去。實驗完畢及時拾掇，堅持實驗室清潔規整，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
（二）從物品、用品消毒滅菌著手
細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌實驗陰性后才華運用。操作室及剩下的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
（三）防止細胞交叉污染
在進行多種細胞培養操作時，所用用具要嚴峻區別，做上符號便于區分。并按次第進行操作，防止一同進行時易發生混亂。
在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養瓶瓶口，防止把細胞帶到培養液中污染其他細胞。
一切細胞一旦購置，或從別處引進，或自己建立，均應及早留種凍存，一旦發生污染可棄之復蘇，從頭培養。
二、污染的*
培養細胞一經污染，大都較難處理。假如污染細胞價值不大，宜棄之；有細胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復蘇或從頭購置細胞，再培養。若污染細胞價值較大，又難于從頭得到，可采納以下方法*。
（一）運用抗生素
抗生素對殺滅細菌較有用。聯合用藥比單獨用藥效果好。防范用藥比污染后再用藥效果好。防范用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后*用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后效果24～48小時，再換慣例培養液。此法在污染早期可能有用。所用抗生素種類除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進行治療。近年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有用。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液，-20℃保存備用，運用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。運用時先吸除污染的培養液，參加含BM-1的RPMI1640培養液，3天后再吸除培養液，參加含BM-2的RPMI1640培養液，培養4天，如此連續3個次第，直至用33258熒光染色鏡檢證明已*支原體后，再加正常培養液培養傳代3-4次。
（二）運用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經抗血清處理后11天即轉為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較費事，不如用抗生素便利、經濟。
（三）加溫處理
將污染的組織培養物放在41℃培養18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預實驗，摸索能zui大極限殺死支原體又對細胞影響zui小的加熱時刻。此法有時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。
（四）其他方法
除了上述去除污染的方法外，還有動物體內接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培養瓶中加溴尿嘧啶再用光照耀的方法及過濾法等，但均較費事，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之從頭培養。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區楓涇鎮環東一路65弄2號3463室
主營產品：酶聯免疫試劑盒，食品農殘檢測，細胞系，培養基，胎牛血清
©2019 版權所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1262378 站點地圖 技術支持：環保在線 管理登陸
